Koro-sensei Nom original : 殺せんせー
Doubleur / seiyu : Fukuyama Jun
Autre doubleur / seiyu : Seki Tomokazu (Remplacement)
Koro-sensei a l'apparence d'une pieuvre et est capable de se déplacer à une vitesse maximale de Mach 20. Sa véritable nature est inconnue mais il possède le pouvoir de détruire une planète entière. Il aurait en effet pulvérisé la Lune, n'en laissant qu'un croissant, et projette de faire la même chose à la Terre dans un futur proche.
Après avoir passé un accord avec le gouvernement japonais, qui se trouve incapable de le tuer et tente de garder l'existence de cette créature confidentielle, il a pris le poste de professeur principal de la classe 3-E du lycée Kunugigaoka, à condition qu'il ne fasse aucun mal aux élèves. Ceux-ci seront en revanche chargés de la mission de l'assassiner avant qu'il ne mette son plan à exécution, d'ici la fin de leur année scolaire. Ils ont donc un délai d'un an pour accomplir cette mission et sauver la Terre. La récompense attribuée à celui ou celle qui y parviendrait est de 10 milliards de yens.

Malgré les tentatives d'assassinat de ses élèves dont il fait l'objet en permanence et qu'il déjoue en général très facilement, Koro-sensei se révèle être un excellent professeur, très attaché à la classe 3-E. Il prête attention à chacun des étudiants et cherche à cultiver leurs points forts tout en comblant leurs lacunes, et les invite à faire preuve de créativité à chaque tentative d'assassinat ratée pour les motiver davantage. En tant qu'enseignant, il est très cultivé dans de nombreux domaines, mais en dehors des cours, il est doublé d'un incorrigible pervers.
Son visage peut changer de couleur suivant ses humeurs.

Shiota NagisaNom original : 潮田 渚
Doubleur / seiyu : Fuchigami Mai (seiyu)
Autre doubleur / seiyu : Toyama Nao (Remplacement)
Nagisa est un élève de la classe 3-E du lycée Kunugigaoka et un apprenti tueur à gages. C'est un garçon réservé et discret, souvent confondu pour une fille à cause de ses couettes et son apparence frêle. Il est très observateur et étudie minutieusement les habitudes de Koro-sensei, dont il prend note dans l'espoir de trouver une faille à exploiter afin de le tuer.

Akabane Karma Nom original : 赤羽 業
Doubleur / seiyu : Okamoto Nobuhiko
Karma Akabane est un élève du lycée Kunugigaoka réputé pour son tempérament violent et bagarreur. Malgré ses excellents résultats scolaires, son attitude problématique lui a valu d'être envoyé en classe 3-E, et de se retrouver fréquemment suspendu de cours dû à son comportement brutal et irrespectueux.

Karma avait autrefois le soutien de son ancien professeur principal, jusqu'à ce que celui-ci se retourne contre lui pour avoir défendu un élève de la classe 3-E contre d'autres du bâtiment principal. Jugeant que la personne en laquelle il avait le plus confiance était morte à ses yeux depuis cette trahison, le jeune garçon nourrit une rancœur féroce à l'égard des enseignants.
Karma est le premier élève de la classe 3-E à être parvenu à blesser Koro-sensei (et avec facilité). Il projettera de détruire son nouveau professeur principal en tant que personne et surtout en tant qu'enseignant, multipliant les tentatives d'assassinat vicieuses à son retour de suspension.

Kayano Kaede Nom original : 茅野 カエデ
Doubleur / seiyu : Suzaki Aya
Autre doubleur / seiyu : Taketatsu Ayana
Kaede Kayano est une élève de la classe 3-E, et la voisine de table de Nagisa, dont elle est très proche. C'est elle qui a eu l'idée du nom de Koro-sensei pour le professeur à partir du mot korosenai (littéralement: "qu'on ne peut pas tuer"), suite à l'échec de du plan de Ryôma Terasaka.
Elle agit en général en tant que soutient durant les exercices et tentatives d'assassinat.
Elle est quelque peu complexée par son tour de poitrine et à l'exception de sa camarade de classe Tôka Yada, elle n'apprécie pas les femmes dotées de gros seins.